产品货号:
BTN3070
中文名称:
动物RNA提取试剂
英文名称:
Animal RNA Purification Reagent
产品规格:
250mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品是跟TRIzol一样的、基于异硫氰酸胍/酚/氯仿提取RNA原理开发的快速总RNA提取试剂,可用于从各种动物组织(包括白细胞)和部分植物材料中快速提取总RNA。

- 操作简单快速,只要10分钟左右,可以全在室温下进行。
- RNA质量高,OD260/OD280一般在1.9左右。一般不含用RT-PCR可以检测到的基因组DNA污染。
- 适用于大部分实验材料,如培养细胞、各种动物材料和少数植物材料。

| 组分 | 规格 |
| 动物RNA提取试剂 | 250mL |
| 说明书 | 1份 |
保存:2~8℃,有效期1年。

氯仿、异丙醇、75%乙醇、RNase-free水。

下面的操作步骤是用1mL本制品进行的微量提取的,细胞使用量一定要准确,不能超过下述用量,否则将超出本制品的裂解能力,RNA产量将急剧降低。如果样品量大,请按比例增加各成份的用量。RNA工作环境最好用高效无毒的RNase污染清除剂彻底处理。
- 对贴壁细胞(10平方厘米):吸尽培养液,加入1mL的本制品用枪充分吹打确保细胞全部裂解,然后将裂解液转移至干净的1.5mL塑料离心管中,进入第6步。
- 对悬浮细胞(五百万至一千万个):离心收集细胞,吸尽液体,加入1mL本制品,用枪充分吹打确保细胞全部裂解,然后将裂解液转移到干净的1.5mL塑料离心管中,进入第6步。
- 对新鲜组织(50~100mg):将新鲜组织剪切成小块,放入10mL或15mL塑料离心管中,加入1mL的本制品,用Polytron剪切式匀浆器冰上匀浆30秒左右,将匀浆液转移至新的1.5mL塑料离心管中,进入第6步。
- 对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA),使用量不要超过30~50mg,否则十分容易产生DNA污染。对10mg以下的组织,最好加入本公司的微量RNA助沉剂。
- 对非冻型RNA保存液保存的组织(50~100mg):先用纸吸去RNA保存液后再剪切成小块,其余操作同第3步。
- RNA保存液处理后的组织韧性很强,匀浆时间需要适当延长。
- 对液氮中保存的组织(50~100mg):在研钵中研磨成粉,加入1mL本制品,用枪充分吹打确保细胞全部裂解,然后将裂解液转移到干净的1.5mL塑料离心管中,进入第6步。
- 在装有裂解物/匀浆物的1.5mL塑料离心管中加入0.2mL自备氯仿,振荡器上充分振荡混均30秒。
- 一定要把官底的溶液震荡起来,否则只是液面的振动。
- 13000~15000×g室温离心3分钟。
- 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中。
- 下层有机相(蓝色)和中间层含有DNA和蛋白质,避免触及,否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见,可以留下50~100μL上清液不取。
- 对脂类丰富的组织(如脂肪组织和脑组织),需再重复氯仿抽提一到两次以让氯仿充分去除脂类分子。
- 在上清液中加入等体积的异丙醇,振荡器上振荡30秒混匀。
- 13000~15000×g室温离心5分钟,离心底的侧面将形成RNA沉淀。
- 如果组织使用量低于10mg或需要提高RNA回收率,可以将离心时间延长到20或30分钟。
- 小心吸弃上清液,注意不要吸弃RNA沉淀。
- 在含RNA沉淀的离心管中加入1mL 75%乙醇,振荡混匀30秒。
- 13000~15000×g室温离心1分钟。
- 小心吸弃上清液,注意不要吸弃RNA沉淀。
- 重复第13-15的洗涤步骤一次(也可以省略)。
- 短暂快速离心,用移液枪小心吸弃残留乙醇(约50μL)。
- 不要吸弃RNA沉淀。
- 此步十分重要,否则残留的乙醇会影响RNA的后续使用。
- 不要吸弃RNA沉淀。
- 室温放1~2分钟后立即加入50~100μL RNase-free水使RNA沉淀溶解。
- 千万不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥,否则RNA将变得十分难溶。
- RNA样品可以立即使用或存放于-80℃待用。
- 千万不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥,否则RNA将变得十分难溶。

RNA的浓度和质量检测 :
- RNA的浓度可以用pH在7.5-8.2的TE缓冲液将5~10μL RNA稀释10~20倍后在OD260和OD260测光吸收,通过光吸收可以得出RNA浓度(1OD260的RNA=40μg/mL),进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。RNA的产率随组织的营养状态和组织的种类不同而不同,一般来说,代谢旺盛的组织(如肝脏和肾脏)RNA的产率高,代谢不旺盛的组织(如肌肉和脂肪组织)RNA的产率低。肌肉、胎盘和脑组织一般是1~2μg RNA/mg组织,肝、胰和肾组织一般是5~10μg RNA/mg组织,培养细胞一般是5~15μg/106细胞。
- RNA的纯度通过OD260/OD280来确定,一般在1.8~2.1之间即算合格。但即使低于此范围,一般也不会影响RT-PCR等反应。如果有蛋白质污染,可以通过酚/氯仿抽提一次然后酒精沉淀去除,如果有多糖污染可以用本公司的RNA多糖清除剂去除。
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